组织分离法（见图12）：
（1）同孢子分离法一样先选取种菇，放入无菌纸袋中带回接 种室（箱）。
（2）用棉球蘸75%的酒精洗擦双手和工具，再用0.1%的升汞 溶液消毒种菇表面。
（3）将解剖刀蘸酒精后，在酒精灯火焰上灼烧灭菌、冷却， 把种菇从菇盖到菌柄纵切为两半，在菌盖与菌柄交界处按“ 目”字形切取一小块菌肉（不能带菌褶），用接种钩钩取， 并迅速移接到试管培养基斜面上。
（4）将试管放在23℃～27℃的恒温箱中培养。
（5）进行选优、转管、培养，即成母种。
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