第一种方法是斜面低温保藏法:将长满菌丝的试管用硫酸纸 包扎好,放在4℃~6℃的冰箱中,每隔3~4个月转管一次。 如果用石蜡封口,转管期可延迟至6个月。转管时,一般应调 换培养基配方,以补充营养,使菌丝生长健壮。
第二种方法是液体石蜡灌注保藏法:将液体石蜡倒入三角瓶 中,倒入量为三角瓶容量的1/3,塞好棉塞,在0.1兆帕的压 力下灭菌30分钟,24小时后再如此灭菌一次。然后置于40℃ 恒温箱中2周,令其水分蒸发,使石蜡由浑浊变透明。冷却后 ,在无菌箱(室)内用无菌吸管或注射器将液体石蜡注入待 藏菌种试管中(见图14),高出斜面尖端1~1.5厘米。
塞上棉塞,剪去管口以外的棉塞,用熔化的固体石蜡将管口 封住,直立地放入试管筐中,放在清洁、凉爽(4℃~15℃) 干燥处,一般可保藏5~7年。如果液体石蜡面变浅,应及时 补充无菌石蜡,切忌培养基露出液面。
转管使用时,不必倒出石蜡,只需用接种针从斜面上挑取一 小块菌丝体移植即可。刚从石蜡试管中移植的菌丝常黏有液 体石蜡,因此,菌丝生长较弱,需要再移植1 次才能恢复正 常生长。
第三种方法是化肥土法保藏法:在广口保温瓶或厚壁瓦罐中 盛一定量的水,加入普通化肥硝酸铵或硫酸铵使其溶解,加 至不再溶解为止。将试管母种用塑料袋装好,扎紧袋口,放 入保温瓶中,将保温瓶放在温度低、空气不流通的地方,并 且要经常检查瓶内温度使其始终保持0℃~5℃,否则要更换瓶 内溶液,重做保藏液。
第四种方法是粪草保藏法:把发酵好的粪草培养料晒干,除 去粪块,将秸秆剪成2厘米长的小段,在清水中浸泡4~5小时 后捞出,挤出多余的水分,装入20毫米×20毫米的试管中, 保持松紧适度。
然后清洗管壁,塞上棉塞,在0.5帕的压力下灭菌2小时,冷 却后,接入要保藏的菌种。在25℃下培养,菌丝长满后用熔 化的固体石蜡将管口封住,放在4℃冰箱中,两年转管一次。
对暂时不用的各级成品菌种,要采取一定的技术措施和方法 进行贮藏,防止污染并减缓老化。菌种贮藏的原则是避免高 湿,降低温度,阻止光照。母种的贮藏方法是:将母种置于4 ℃~6℃冰箱中,使用之前取出,在温室或培养箱中给予适宜 的温度活化24小时后,即可接种。贮藏母种的冰箱切忌与含 水量较高的食物同放,否则极易引起污染。
在1℃条件下,菌种可整箱进行贮藏2~3个月。但场所要洁净 、通风、干燥、避光,不要与农药、化肥等物资混放;贮藏 室要提前消毒灭虫;尽量减少或避免人事活动;菌种摆放要 适当分散,不可堆积,以利散热散温;贮藏期间不要中途改 变贮藏室,以减少搬运而造成的破损和污染。